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D-荧光素钾盐在生物发光中起着重要作用，其原理主要涉及以下几个方面。一、作为萤火虫荧光素酶底物化学反应过程：D-荧光素钾盐被萤火虫荧光素酶催化，发生氧化反应从而产生生物发光。在这个过程中，D-荧光素钾盐在酶的作用下被氧化，形成激发态的氧化荧光素，当激发态的氧化荧光素回到基态时，就会释放出光子，产生可见光29。影响发光的因素：生物发光的强度受到多种因素的影响。一方面，底物的浓度会影响发光强度，一般来说，在一定范围内增加底物浓度可以提高发光强度，但过高的浓度可能会产生抑制作用2。另一方面，环境因素如温度、pH值等也会对发光产生影响。例如，适宜的温度和pH值可以保证荧光素酶的活性，从而提高生物发光的效率。PAT 结合了光学的高对比度和声学的高分辨率的优势，在近红外光波段，血红蛋白有较高的吸收系数。江苏荧光染料Cy5.5
分散荧光染料：分散荧光桃红BG染料色浆离心50min后的比吸光度仍达到78.1％，离心稳定性较好。在55℃条件下放置5d后分散荧光染料色浆的粒径有所增加，其中分散荧光桃红BG染料色浆粒径的增加率*为7.5％，染料色浆热稳定性能较好；加热处理过后分散荧光染料色浆的荧光强度有所降低11。这表明分散荧光染料的稳定性在一定时间和温度范围内能够保持较好，但随着时间的延长和条件的变化，其稳定性会逐渐下降。在动物成像中，这可能会限制成像的时间窗口，影响对动物体内动态过程的长期观察。近红外荧光染料：近红外荧光染料的稳定性差异会直接影响成像的持久性。光稳定性高的近红外荧光染料能够在较长时间内保持较强的荧光信号，为动物成像提供更持久的观察窗口。例如，Hc-BIZ的光稳定性远高于Hc-BTZ，这意味着在动物成像中，使用Hc-BIZ可能会获得更持久的成像效果，有利于对动物体内的长期监测和研究12。江苏荧光染料Cy5.5噁嗪衍生物荧光染料由于其在动物神经成像方面的潜在应用价值，近年来受到了关注。
神经特异性荧光染料：新型噁嗪类荧光染料 YQN - 3 在静脉注射 4 h 后在臂丛神经和坐骨神经中显示出高特异性神经靶向信号。其合成工艺简单，毒性小，具有潜在的临床神经组织显像应用前景8。这类荧光染料的稳定性对于准确显示动物的神经结构至关重要。如果稳定性不足，可能会导致成像信号减弱，影响对神经组织的精细定位和识别。
不同类型的荧光染料稳定性差异对动物成像结果有着多方面的影响，包括成像信号强度、成像部位特异性、成像时间和持久性以及成像质量和准确性等。在选择荧光染料进行动物成像时，需要充分考虑其稳定性特点，以获得更可靠、准确的成像结果。
肿瘤细胞成像：近红外荧光染料IR-780具备使多种肾透明细胞*细胞显像的能力，对正常肾胚上皮细胞则无此能力，可用于血液中肾透明细胞*细胞的特异性诊断。这为肿瘤细胞的检测和诊断提供了新的方法21。疾病标志物检测：设计合成的近红外荧光探针RB-Phenylacrylate(NOF1)，用于高选择性和高灵敏度检测半胱氨酸(Cys)，并成功应用于活细胞、斑马鱼和小鼠中半胱氨酸的近红外荧光成像检测。近红外荧光探针RB-Phenyldiphenylphosphinate(NOF2)用于过氧亚硝酸根的荧光成像，实现了活细胞和小鼠炎症模型中ONOO⁻的荧光成像检测。这些探针为疾病标志物的检测和成像提供了新的手段23。四、支持超分辨率成像新型近红外氧杂蒽荧光染料如KRhs，可用于超分辨率成像。KRhs显示出强烈的近红外发射峰，在700nm处具有高荧光量子产率，且在没有增强缓冲液的帮助下，表现出随机荧光开关特性，支持单荧光团的时间分辨定位。KRhs被功能化为KRh-MitoFix、KRh-Mem和KRh-Halo，分别具有线粒体、质膜和融合蛋白靶向能力，可用于活细胞中这些目标的超分辨率成像20。动物成像技术的一个重要发展方向是多模态融合成像。
优化合成方法：寻找替代溶剂合成 “Nile Red”：“Nile Red” 是一种荧光、亲脂性有机染料，用于荧光显微镜中选择性识别微塑料以及在生物研究中用于细胞内脂质的定位和定量。由于对 N,N - 二甲基甲酰胺（DMF）溶剂的使用限制，需要优化一种基于另一种溶剂的方法来合成 “Nile Red”，同时保持化合物的比较好成本。通过对不同有机溶剂的筛选，发现甲醇作为替代溶剂时，“Nile Red” 的 HPLC 产率较高。合成的 “Nile Red” 纯度为 94%，适用于荧光显微镜23。合成了一系列中位引入电子给体对氨基苯或对羟基苯的五甲川菁染料。安徽荧光染料
将吲哚菁绿（ICG）掺入小杯芳烃（S4 - 6）胶束中，可以明显改善 ICG 的水稳定性和荧光亮度。江苏荧光染料Cy5.5
荧光染料的作用过程吸收激发光：当荧光染料暴露在特定波长的激发光下时，染料分子中的电子吸收光子的能量，从基态跃迁到激发态。这个过程非常迅速，通常在飞秒到皮秒的时间尺度内完成25。激发态的电子弛豫：处于激发态的电子不稳定，会通过各种方式释放能量，回到基态。这个过程包括内部转换和振动弛豫等。内部转换是指激发态的电子通过无辐射跃迁的方式回到能量较低的激发态，而振动弛豫则是指激发态的电子通过与周围分子的碰撞等方式，将多余的能量转化为分子的振动能，从而使电子处于激发态的比较低振动能级35。发射荧光：当激发态的电子回到基态时，会发射出荧光。荧光的波长通常比激发光的波长更长，这是因为在发射荧光的过程中，电子释放的能量一部分以热能的形式散失，导致发射的光子能量较低，波长较长。江苏荧光染料Cy5.5
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